RNF40 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404156

Descripción general

RNF40 codifica una ligasa E3 de ubiquitina con dominio RING que forma un heterodímero obligado con RNF20 para monoubiquitinar la histona H2B (H2BK120ub), una modificación clave de la cromatina que vincula la elongación transcripcional con el crosstalk epigenético hacia la metilación de H3K4 y H3K79. A través de esta actividad, RNF40 regula programas de expresión génica dependientes de la ARN polimerasa II, la accesibilidad de la cromatina y respuestas coordinadas al daño del ADN que dependen de la remodelación de la cromatina en sitios de estrés replicativo o de roturas de doble cadena. La ubiquitinación de H2B dependiente de RNF40 impacta el control del ciclo celular y redes transcripcionales específicas de linaje, por lo que es relevante para estudios de estabilidad genómica y de transcripción desregulada observadas en cáncer y otros trastornos proliferativos. La señalización alterada de RNF40 también se ha relacionado con cambios en vías inflamatorias y del desarrollo mediante un control dependiente del contexto de la función de potenciadores (enhancers) y promotores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RNF40 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RNF40 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RNF40 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RNF40 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RNF40.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RNF40 para la investigación de la señalización de RNF40, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RNF40 críticos para la función de RNF40
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RNF40 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RNF40 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RNF40 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RNF40. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RNF40 (h) y el plásmido HDR RNF40 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RNF40 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RNF40 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.