Rnd1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406603

Descripción general

RND1 codifica Rnd1, una pequeña GTPasa atípica de la familia Rho que permanece de forma constitutiva unida a GTP y actúa principalmente como regulador de la organización del citoesqueleto de actina y de la adhesión celular. La señalización de Rnd1 antagoniza la contractilidad dependiente de RhoA/ROCK, lo que influye en la formación de fibras de estrés, la dinámica de las adhesiones focales y el redondeamiento celular, con efectos posteriores sobre la migración y el crecimiento de neuritas. Mediante el crosstalk con la señalización de integrinas y las vías de remodelación del citoesqueleto, Rnd1 ayuda a coordinar cambios en la morfología celular durante el desarrollo y la homeostasis tisular. La expresión alterada de RND1 o un desequilibrio de su vía se ha asociado con fenotipos de motilidad e invasión desregulados en biología del cáncer y con alteraciones en procesos neuronales y vasculares estudiados en modelos relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rnd1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RND1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RND1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RND1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rnd1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RND1 para la investigación de la señalización de Rnd1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RND1 críticos para la función de Rnd1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RND1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rnd1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Rnd1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RND1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rnd1 (h) y el plásmido HDR Rnd1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RND1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RND1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.