RMI2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407104

Übersicht

RMI2 (RecQ-vermittelte Genominstabilität 2) kodiert eine konservierte Komponente des BLM–TOP3A–RMI1/2-Dissolvasoms, das die Auflösung doppelter Holliday-Junctions fördert, um Schwesterchromatidaustausche zu unterdrücken und die Genomstabilität zu erhalten. Durch die Koordination der Prozessierung von Zwischenprodukten der homologen Rekombination unterstützt RMI2 einen fehlerfreien Neustart von Replikationsgabeln und begrenzt aberrante Crossing-over-Ereignisse während der DNA-Reparatur. Diese Aktivität verknüpft RMI2 mit zentralen Signalwegen der DNA-Schadensantwort und der Zellzyklus-Checkpoint-Kontrolle unter Replikationsstress. Eine Störung der Dissolvasom-Funktion, einschließlich veränderter RMI2-Aktivität, ist mit erhöhter chromosomaler Instabilität und Phänotypen assoziiert, wie sie bei Bloom-Syndrom-ähnlichen Defekten der Genomerhaltung beobachtet werden, und ist daher relevant für die Untersuchung von Mechanismen, die zu krebsassoziierten Mutationsprozessen beitragen.

Das RMI2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RMI2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RMI2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RMI2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RMI2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RMI2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RMI2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RMI2-Exone abzielen, die für die RMI2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RMI2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RMI2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RMI2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RMI2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RMI2 HDR-Plasmid (h) und RMI2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RMI2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RMI2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.