Plasmide CRISPR/Cas9 KO RIP140 (m): sc-435290

Présentation

Le gène murin **Nrip1** code RIP140 (NRIP1), un corégulateur des récepteurs nucléaires dépendant des ligands, qui agit principalement comme corépresseur transcriptionnel en recrutant des complexes de modification de la chromatine, notamment des assemblages contenant des HDAC. RIP140 intègre les signaux provenant de récepteurs nucléaires tels que les PPAR, ER, TR et RXR afin de moduler des programmes géniques contrôlant la fonction mitochondriale, le métabolisme oxydatif, la différenciation adipocytaire et les réponses transcriptionnelles inflammatoires. Par ces voies, **Nrip1** est largement utilisé pour étudier l’homéostasie métabolique, la dépense énergétique et les réponses inflammatoires médiées par les macrophages. Une dérégulation du contrôle transcriptionnel dépendant de RIP140 a été associée, dans des contextes de recherche préclinique, à des phénotypes pertinents pour l’obésité, la résistance à l’insuline, la biologie de la stéatose hépatique et des modèles tumoraux hormono-dépendants.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RIP140 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nrip1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nrip1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nrip1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RIP140.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nrip1 pour l'étude de la signalisation de RIP140, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nrip1 essentiels à la fonction de RIP140
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nrip1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RIP140 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RIP140 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nrip1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RIP140 plasmide HDR (m) et le RIP140 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nrip1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nrip1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.