Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RIP/Rab Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420946
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- RIP/Rab El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico RIP/Rab, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RIP/Rab Anticuerpo (H-2): sc-166651
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
RIP/Rab Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420946 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Agfg1 codifica RIP/Rab, una ArfGAP que acopla la señalización del factor de ADP-ribosilación (ARF) al tráfico de membranas endocítico y a la organización del citoesqueleto. Mediante la regulación de los ciclos de pequeñas GTPasas, RIP/Rab contribuye a la internalización de receptores, la gemación de vesículas y el reciclaje desde endosomas hacia la membrana plasmática, procesos que influyen en las respuestas de señalización de factores de crecimiento. La alteración de estos nodos de tráfico puede modificar la polaridad celular, la migración y las respuestas al estrés, vinculando las vías dependientes de Agfg1 con fenotipos relevantes para la neurobiología y el comportamiento de células cancerosas en sistemas modelo. Por ello, en estudios en ratón, Agfg1 es útil para investigar cómo el tráfico de membranas se cruza con la transducción de señales y la homeostasis celular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO RIP/Rab (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Agfg1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Agfg1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Agfg1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RIP/Rab.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Agfg1 para la investigación de la señalización de RIP/Rab, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Agfg1 críticos para la función de RIP/Rab
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Agfg1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido RIP/Rab CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RIP/Rab CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Agfg1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RIP/Rab (m) y el plásmido HDR RIP/Rab (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Agfg1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Agfg1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.