Plasmide CRISPR/Cas9 KO RIM-BP2 (h): sc-406740

Présentation

RIMBP2 code pour RIM-BP2, une protéine d’échafaudage de la zone active présynaptique qui couple les canaux Ca2+ voltage-dépendants à la machinerie de libération des neurotransmetteurs via des interactions avec les protéines RIM et d’autres composants synaptiques. En coordonnant l’influx de Ca2+ avec l’arrimage et l’amorçage des vésicules synaptiques, RIM-BP2 favorise une exocytose efficace déclenchée par le potentiel d’action ainsi que la plasticité synaptique à court terme au niveau des synapses excitatrices. Cette protéine participe à la signalisation dépendante du Ca2+ dans le compartiment présynaptique et influence la dynamique du cycle vésiculaire qui façonne la force synaptique. Des perturbations génétiques de RIMBP2 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des défauts de transmission synaptique et des dysfonctionnements des circuits neuronaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RIM-BP2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RIMBP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RIMBP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RIMBP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RIM-BP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RIMBP2 pour l'étude de la signalisation de RIM-BP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RIMBP2 essentiels à la fonction de RIM-BP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RIMBP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RIM-BP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RIM-BP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RIMBP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RIM-BP2 plasmide HDR (h) et le RIM-BP2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RIMBP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RIMBP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.