Plásmido CRISPR de Activación (h) Ribosomal Protein S15: sc-410994-ACT

RPS15 codifica la proteína ribosomal S15, un componente conservado de la subunidad ribosomal pequeña 40S que favorece la biogénesis del ribosoma y el inicio de la traducción al contribuir al procesamiento del pre-ARNr y a la decodificación del ARNm. Como parte de la maquinaria central de traducción, RPS15 se vincula con vías que regulan la síntesis proteica, el crecimiento celular y la regulación adaptativa de la traducción frente al estrés. Las alteraciones en la dosis de proteínas ribosomales pueden influir en la función nucleolar y en la proteostasis, procesos que se estudian con frecuencia en el contexto del control de la proliferación y de las respuestas celulares al estrés. La biogénesis ribosomal y la producción traduccional alteradas también son relevantes para las ribosomopatías y para la investigación de programas de crecimiento desregulados observados en contextos asociados al cáncer.

Ribosomal Protein S15 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPS15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ribosomal Protein S15 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPS15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPS15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ribosomal Protein S15. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPS15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ribosomal Protein S15 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ribosomal Protein S15 en células tumorales con expresión de RPS15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.