Ribosomal Protein L30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406356
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Ribosomal Protein L30 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Ribosomal Protein L30-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Ribosomal Protein L30: sc-517163
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ribosomal Protein L30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-406356 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
RPL30 kodiert das ribosomale Protein L30, einen zentralen Bestandteil der großen ribosomalen 60S-Untereinheit, der zur Ribosomenassemblierung und zur Elongation während der Translation beiträgt. Als Teil des Netzwerks der Ribosomenbiogenese und Proteinsynthese unterstützt RPL30 die Proteostase und wachstumsassoziierte Signalwege, indem es eine effiziente mRNA-Translation ermöglicht. Störungen ribosomaler Proteine können nukleoläre Stressantworten auslösen und p53-abhängige Checkpoints verändern, wodurch Ribosomenfunktion mit Zellzykluskontrolle und Apoptose verknüpft wird. Eine dysregulierte Ribosomenbiogenese und Translationskontrolle sind wiederkehrende Merkmale in proliferativen sowie stressadaptiven Zuständen, was RPL30 für die Untersuchung von Mechanismen relevant macht, die Translationskapazität mit zellulärer Fitness koppeln.
Das Ribosomal Protein L30 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RPL30-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RPL30-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RPL30 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ribosomal Protein L30-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RPL30-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ribosomal Protein L30-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf RPL30-Exone abzielen, die für die Ribosomal Protein L30-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere RPL30-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Ribosomal Protein L30 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Ribosomal Protein L30 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RPL30-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ribosomal Protein L30 HDR-Plasmid (h) und Ribosomal Protein L30 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RPL30-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RPL30-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.