Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rheb (m): sc-422675

Présentation

La protéine Rheb de la souris est une petite GTPase apparentée à Ras qui agit comme un activateur central de mTORC1 au niveau des membranes lysosomales, intégrant la signalisation des facteurs de croissance, la détection des acides aminés et l’état énergétique cellulaire pour réguler la synthèse protéique, l’autophagie et la croissance cellulaire. Via le complexe TSC1/TSC2, l’activité de Rheb est étroitement contrôlée par la voie PI3K–AKT et par des signaux liés au stress, modulant ainsi le métabolisme anabolique et l’homéostasie mitochondriale. Une signalisation Rheb–mTORC1 dérégulée est impliquée dans des phénotypes du neurodéveloppement, la biologie tumorale et le remodelage métabolique, faisant de Rheb une cible fréquemment utilisée pour disséquer la signalisation nutritive et le contrôle de la croissance. Dans les systèmes murins, la perturbation de Rheb permet des études mécanistiques des programmes de traduction dépendants de mTOR, de la signalisation associée aux lysosomes et de l’adaptation au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rheb (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rheb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rheb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rheb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rheb.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rheb pour l'étude de la signalisation de Rheb, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rheb essentiels à la fonction de Rheb
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rheb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rheb plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Rheb plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rheb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rheb plasmide HDR (m) et le Rheb (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rheb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rheb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.