Rheb CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422675

概要

マウスRhebは、Ras関連の低分子GTPアーゼをコードしており、リソソーム膜上でmTORC1の中核的な活性化因子として機能する。増殖因子シグナル、アミノ酸感知、細胞のエネルギー状態を統合して、タンパク質合成、オートファジー、細胞増殖を制御する。Rheb活性はTSC1/TSC2複合体を介して、PI3K–AKTシグナルやストレス応答性の入力により厳密に制御され、同化代謝およびミトコンドリア恒常性の形成に関与する。Rheb–mTORC1シグナルの破綻は、神経発生に関わる表現型、腫瘍生物学、代謝リモデリングに関連するとされており、Rhebは栄養シグナル伝達と増殖制御を解明するための重要な解析ノードとして広く用いられている。マウス系の研究では、Rhebを改変することで、mTOR依存的な翻訳プログラム、リソソーム関連シグナル、ストレス適応の機構研究が可能となる。

Rheb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRheb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rheb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rhebのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rhebタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rhebシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rheb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rhebの機能に不可欠なRhebエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rhebゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rheb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRheb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rheb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rheb HDRプラスミド（m）および Rheb HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRhebホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRheb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。