Plasmide CRISPR/Cas9 KO RHAMM (m): sc-420881
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- RHAMM Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique RHAMM, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RHAMM Antibody (H-8): sc-515221
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO RHAMM (m) | sc-420881 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Hmmr code pour RHAMM (receptor for hyaluronan-mediated motility), une protéine interagissant avec les microtubules et l’hyaluronane, qui coordonne l’organisation du cytosquelette, la fonction du centrosome et l’assemblage du fuseau mitotique. RHAMM contribue à la migration et à la prolifération cellulaires en intégrant les signaux de la matrice extracellulaire à la dynamique intracellulaire des microtubules et à des voies de signalisation liées à la motilité et à la progression du cycle cellulaire. Dans les modèles murins, une activité altérée de RHAMM a été associée à une mitose dérégulée, à une instabilité génomique et à des processus anormaux de remodelage tissulaire pertinents pour la biologie du cancer et les microenvironnements inflammatoires. Ces caractéristiques font de Hmmr une cible utile pour analyser l’interface entre la signalisation par l’hyaluronane, la régulation du fuseau et les programmes de motilité.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RHAMM (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hmmr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hmmr, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hmmr à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RHAMM.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hmmr pour l'étude de la signalisation de RHAMM, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Hmmr essentiels à la fonction de RHAMM
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hmmr pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le RHAMM plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RHAMM plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hmmr. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le RHAMM plasmide HDR (m) et le RHAMM (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hmmr pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hmmr définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.