RGS8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403199

概要

RGS8（regulator of G protein signaling 8）はGTPase活性化タンパク質（GAP）であり、Gαサブユニットの不活性化を促進することで、GPCR（Gタンパク質共役型受容体）によって開始されるシグナル伝達の終結を加速します。ヒト細胞では、RGS8はcAMP/PKA経路やPLCβ/Ca2+経路などのセカンドメッセンジャー出力を調節し、受容体駆動性応答の振幅と持続時間を形作ります。RGS8は神経系の文脈で多く発現しており、Gi/oおよびGq共役カスケードの制御を通じて、シナプスシグナル伝達やネットワーク興奮性の制御に寄与します。RGS8の発現量や活性の変化は、神経伝達の破綻や神経精神疾患様の表現型との関連で検討されており、GPCR経路のチューニング機構を解明する研究において重要な分子です。

RGS8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRGS8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RGS8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RGS8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RGS8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RGS8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RGS8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RGS8の機能に不可欠なRGS8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RGS8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RGS8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRGS8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RGS8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RGS8 HDRプラスミド（h）および RGS8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRGS8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRGS8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。