Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RFXAP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406793
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- RFXAP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico RFXAP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RFXAP Anticuerpo (RFXAD55A): sc-81368
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
RFXAP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406793 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
RFXAP (proteína asociada al factor regulador X) es un cofactor esencial del complejo transcripcional RFX, que se une al elemento promotor X-box para impulsar la expresión de los genes del MHC de clase II. A través de esta función, RFXAP favorece el procesamiento y la presentación de antígenos y modula la activación de la inmunidad adaptativa al regular programas transcripcionales dependientes de CIITA. Las variantes con pérdida de función en RFXAP alteran la expresión del MHC de clase II y se asocian con el síndrome del linfocito desnudo tipo II, caracterizado por una vigilancia inmunitaria deficiente. En sistemas modelo, la alteración de RFXAP afecta vías sensibles al interferón, la diferenciación de células inmunitarias y mecanismos que gobiernan las interacciones huésped–patógeno.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO RFXAP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RFXAP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RFXAP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RFXAP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RFXAP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RFXAP para la investigación de la señalización de RFXAP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de RFXAP críticos para la función de RFXAP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RFXAP para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido RFXAP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RFXAP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RFXAP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RFXAP (h) y el plásmido HDR RFXAP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RFXAP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RFXAP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.