Rfp2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403870

Descripción general

TRIM13 codifica la ligasa E3 de ubiquitina humana con dominio RING Rfp2, una proteína asociada predominantemente al retículo endoplásmico, implicada en la proteostasis dependiente de ubiquitina y en el control de calidad del RE. Rfp2 participa en la regulación del recambio proteico y de la señalización sensible al estrés al promover la ubiquitinación de sustratos, lo que la vincula a procesos como la degradación asociada al RE, la regulación de la apoptosis y la modulación de vías de la inmunidad innata. La alteración de la expresión o actividad de TRIM13 se ha estudiado en el contexto de la adaptación al estrés celular y de la señalización por ubiquitina desregulada, que puede contribuir a fenotipos oncogénicos y a proteinopatías neurodegenerativas. Como parte de la familia TRIM, Rfp2 constituye un nodo abordable para desentrañar el cableado de las vías de ubiquitina y la señalización localizada en orgánulos en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rfp2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TRIM13 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TRIM13 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TRIM13 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rfp2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TRIM13 para la investigación de la señalización de Rfp2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TRIM13 críticos para la función de Rfp2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TRIM13 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rfp2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Rfp2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TRIM13. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rfp2 (h) y el plásmido HDR Rfp2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TRIM13 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TRIM13 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.