Rfp2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403870

概要

TRIM13は、ヒトのRINGフィンガー型E3ユビキチンリガーゼRfp2をコードしており、主として小胞体に局在するタンパク質として、ユビキチン依存的なプロテオスタシスおよび小胞体の品質管理に関与すると考えられています。Rfp2は基質のユビキチン化を促進することで、タンパク質分解回転やストレス応答性シグナル伝達の制御に関わり、小胞体関連分解（ERAD）、アポトーシス制御、自然免疫経路の調節などのプロセスと関連付けられています。TRIM13の発現や活性の変化は、細胞ストレスへの適応や、がん原性表現型および神経変性タンパク質病態に寄与し得るユビキチンシグナル伝達の破綻といった文脈で研究されています。TRIMファミリーの一員として、Rfp2はヒト細胞におけるユビキチン経路の配線やオルガネラ局在型シグナル伝達を解析するための扱いやすい標的（ノード）となります。

Rfp2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTRIM13遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TRIM13内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TRIM13のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rfp2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rfp2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TRIM13欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rfp2の機能に不可欠なTRIM13エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TRIM13ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rfp2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRfp2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TRIM13遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rfp2 HDRプラスミド（h）および Rfp2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTRIM13ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTRIM13標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。