Reg IIIγ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418109

Descripción general

REG3G codifica la proteína regeneradora derivada de islotes 3 gamma (Reg IIIγ), una proteína antimicrobiana secretada de tipo lectina C implicada en la defensa de la barrera epitelial y en la regulación de la inmunidad innata en superficies mucosas. Reg IIIγ reconoce glicanos de la pared celular bacteriana y contribuye a controlar la colonización microbiana, vinculando su actividad con las interacciones entre el huésped y el microbioma y con la señalización inflamatoria en el tracto gastrointestinal. Su expresión suele ser inducible por vías impulsadas por citocinas, incluida la señalización IL-22/STAT3, y puede modularse aguas abajo de la activación de receptores de reconocimiento de patrones y de respuestas asociadas a NF-κB. La desregulación de la expresión de REG3G se ha asociado con alteraciones de la inmunidad mucosa y fenotipos relacionados con la inflamación, lo que respalda su uso como un nodo funcional en estudios de disfunción de barrera y mecanismos de enfermedad mediada por el sistema inmunitario.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Reg IIIγ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen REG3G en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del REG3G junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de REG3G tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Reg IIIγ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en REG3G para la investigación de la señalización de Reg IIIγ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de REG3G críticos para la función de Reg IIIγ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de REG3G para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Reg IIIγ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Reg IIIγ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus REG3G. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Reg IIIγ (h) y el plásmido HDR Reg IIIγ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología REG3G para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana REG3G definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.