RBM35A Double Nickaseプラスミド (h): sc-405645-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- RBM35A Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- RBM35Aダブルニカースプラスミド（h）およびRBM35Aダブルニカースプラスミド（h2）は、ESRP1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
RBM35A Double Nickaseプラスミド (h) | sc-405645-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RBM35A Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405645-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ESRP1（RBM35A）は、pre-mRNAに結合して上皮系と間葉系の転写産物アイソフォームを区別するオルタナティブスプライシング・プログラムを制御する、上皮性スプライシング調節タンパク質です。細胞間接着、細胞骨格の構築、シグナル伝達に関わる遺伝子におけるスプライス選択を制御することで上皮性のアイデンティティ維持に寄与し、EMT（上皮間葉転換）や上皮分化などの過程に影響します。エクソンの挿入・除外を協調的に調節することで、ESRP1は細胞極性や遊走に関連する経路を形作り、その機能異常は発生過程の転換や腫瘍に伴う表現型スイッチングの文脈で頻繁に研究されています。ESRP1依存的なスプライシング・ネットワークの変化は、浸潤に関与するアイソフォームや系譜可塑性の変動と関連づけられており、RNAプロセシングおよびがん生物学の機構研究において一般的な標的となっています。
RBM35A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ESRP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ESRP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ESRP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ESRP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。