Ras-GRF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422605

Descripción general

Rasgrf1 codifica Ras-GRF1, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina regulado por calcio/calmodulina que activa las GTPasas de la familia Ras y acopla la actividad neuronal a la señalización MAPK/ERK aguas abajo. En el ratón, Ras-GRF1 contribuye a la plasticidad sináptica, el aprendizaje y la memoria, y la expresión génica dependiente de la actividad mediante la modulación de vías vinculadas a Ras y Rap, además de desempeñar funciones adicionales en la señalización asociada a insulina/IGF y en el control del crecimiento en ciertos tejidos. A través de estos nodos de señalización, Ras-GRF1 influye en la proliferación y diferenciación celulares, así como en la dinámica del citoesqueleto, lo que lo hace relevante para estudios de fenotipos del neurodesarrollo y de la biología de la vía de Ras desregulada. La función alterada de Ras-GRF1 se ha investigado en contextos de señalización neuronal aberrante y remodelación oncogénica de vías, lo que respalda su uso como punto de entrada mecanístico para el análisis detallado de rutas de señalización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ras-GRF1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rasgrf1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rasgrf1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rasgrf1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ras-GRF1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rasgrf1 para la investigación de la señalización de Ras-GRF1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rasgrf1 críticos para la función de Ras-GRF1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rasgrf1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Ras-GRF1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Ras-GRF1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rasgrf1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ras-GRF1 (m) y el plásmido HDR Ras-GRF1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rasgrf1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rasgrf1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.