Raptor CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400960-ACT

ヒトRPTORは、mTOR複合体1（mTORC1）の必須スキャフォールド（足場）構成要素であるRaptorをコードしており、S6Kや4E-BP1などの基質をリクルートすることで、栄養、エネルギー、増殖因子からの入力をタンパク質合成、オートファジー抑制、代謝の再プログラミングと協調させます。mTORC1の基質特異性および局在を制御することを通じて、Raptorは細胞増殖、細胞周期の進行、リボソーム生合成、リソソーム関連シグナル伝達に影響を与えます。RPTOR/mTORC1活性の破綻は、がん生物学、代謝疾患、神経発達および神経変性の文脈にわたって観察される同化（アナボリック）シグナルの変化と関連しており、経路解析において広く用いられる重要なノードとなっています。RPTOR発現の調節は、細胞恒常性を形作るPI3K–AKTシグナル、AMPK、ならびに栄養感知経路間のフィードバックを研究するための直接的なアプローチを提供します。

Raptor CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RPTORの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Raptor CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RPTOR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRPTOR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Raptorの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRPTOR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRaptor依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRPTOR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRaptor経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。