Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rap 2B: sc-403292-ACT

RAP2B code pour Rap2B, une petite GTPase apparentée à Ras qui alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de réguler la transduction du signal, le trafic membranaire et le remodelage du cytosquelette. Rap2B participe à des voies associées à l’adhésion médiée par les intégrines, à la dynamique des vésicules et à des sorties de signalisation liées à la voie MAPK, qui façonnent la migration cellulaire et la réactivité des cellules aux signaux extracellulaires. Dans des contextes hématopoïétiques et vasculaires, Rap2B est étroitement associée à l’activation plaquettaire et aux processus de sécrétion, ce qui soutient les études sur la biologie de la thrombose et la signalisation inflammatoire. Une expression ou une activité dérégulée de RAP2B a été rapportée dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, notamment des phénotypes d’invasion et de métastases associés au cancer, ce qui en fait un nœud utile pour l’exploration mécanistique des voies.

Rap 2B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RAP2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rap 2B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RAP2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RAP2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rap 2B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RAP2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rap 2B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rap 2B dans les cellules tumorales présentant une expression de RAP2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.