Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rap 2A (h): sc-403109

Présentation

RAP2A code Rap2A, une petite GTPase apparentée à Ras qui alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de réguler la transduction du signal en aval des récepteurs de surface cellulaire. Rap2A contribue au remodelage du cytosquelette, au trafic vésiculaire et à l’adhérence cellulaire en coordonnant des voies qui influencent la dynamique de l’actine et l’organisation membranaire, notamment via des interactions croisées avec la signalisation MAPK et les réseaux de GTPases de la famille Rho. Par ses rôles dans le contrôle de la polarité cellulaire, de la migration et de la prolifération, une activité altérée de RAP2A a été associée à des phénotypes de croissance et d’invasion dérégulés observés dans de multiples contextes pathologiques, dont le cancer et les affections inflammatoires. RAP2A constitue donc un nœud utile pour analyser comment les circuits de petites GTPases ajustent la signalisation induite par les récepteurs et la plasticité cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rap 2A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RAP2A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RAP2A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RAP2A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rap 2A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RAP2A pour l'étude de la signalisation de Rap 2A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RAP2A essentiels à la fonction de Rap 2A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RAP2A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rap 2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rap 2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RAP2A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rap 2A plasmide HDR (h) et le Rap 2A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RAP2A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RAP2A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.