Ral B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425679

Descripción general

Ralb codifica la pequeña GTPasa Ral B, un interruptor molecular tipo Ras que alterna entre estados unidos a GDP y a GTP para regular el tráfico de membranas y la remodelación del citoesqueleto. Ral B señaliza a través de efectores como el complejo exocisto y RalBP1 para controlar el acoplamiento de vesículas, la endocitosis, la polaridad celular y la citocinesis, y puede interactuar con la señalización de estrés e inmunidad innata mediante vías vinculadas a la activación de TBK1. A través de estos procesos, Ral B influye en programas de proliferación, migración y supervivencia celular que se estudian con frecuencia en el contexto de la salida de la red oncogénica de Ras y la invasión de células tumorales. En modelos de ratón, la alteración de Ralb permite investigar mecánicamente nodos de señalización de pequeñas GTPasas implicados en la biología del cáncer y en fenotipos asociados a la inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ral B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ralb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ralb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ralb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ral B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ralb para la investigación de la señalización de Ral B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ralb críticos para la función de Ral B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ralb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Ral B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Ral B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ralb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ral B (m) y el plásmido HDR Ral B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ralb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ralb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.