Ral A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403983

Übersicht

RALA kodiert RalA, eine Ras-verwandte kleine GTPase, die zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen wechselt, um die Signaltransduktion nachgeschaltet von Inputs der Ras-Familie zu koordinieren. Aktives RalA reguliert den Vesikeltransport, polarisierte Exozytose, Endozytose und den Umbau des Aktinzytoskeletts über Effektoren wie den Exocyst-Komplex und RalBP1 und verknüpft so Membrandynamik mit Zellmigration und Proliferation. Die RalA-Signalgebung ist mit MAPK- und PI3K-assoziierten Netzwerken verknüpft und trägt zur Kontrolle der Zytokinese sowie der mitochondrialen Homöostase bei. Eine fehlregulierte RALA-Aktivität wurde in onkogenen Signalkontexten und veränderten Programmen der Zellmotilität beschrieben, was sie für mechanistische Studien der Tumorbiologie und metastaseassoziierter Signalwege relevant macht.

Das Ral A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RALA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RALA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RALA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ral A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RALA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ral A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RALA-Exone abzielen, die für die Ral A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RALA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ral A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Ral A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RALA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ral A HDR-Plasmid (h) und Ral A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RALA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RALA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.