Rag A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411501

Descripción general

RRAGA codifica Rag A, una pequeña GTPasa relacionada con Ras que forma heterodímeros con RagC/D para acoplar la disponibilidad intracelular de aminoácidos a la activación de mTORC1 en la superficie lisosomal. Mediante un ciclo regulado entre los estados unidos a GDP y a GTP, y su interacción con el complejo Ragulator y los reguladores GATOR, Rag A controla la fosforilación de sustratos de mTORC1, coordinando la síntesis de proteínas, la supresión de la autofagia y la reprogramación metabólica. La señalización desregulada de las GTPasas Rag y la actividad aberrante de mTORC1 están implicadas en la biología del cáncer y en contextos de enfermedades metabólicas y del neurodesarrollo, lo que convierte a RRAGA en un nodo útil para diseccionar los circuitos de detección de nutrientes. La perturbación genética de RRAGA permite estudios mecanísticos de la señalización dependiente de lisosomas y de las vías de traducción y autofagia aguas abajo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rag A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RRAGA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RRAGA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RRAGA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rag A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RRAGA para la investigación de la señalización de Rag A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RRAGA críticos para la función de Rag A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RRAGA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rag A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Rag A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RRAGA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rag A (h) y el plásmido HDR Rag A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RRAGA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RRAGA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.