Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
RADX Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409991
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- RADX El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico RADX, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RADX Anticuerpo (A-3): sc-514563
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
RADX Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-409991 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CXorf57 codifica RADX, un factor de unión a ADN monocatenario que modula la dinámica de la horquilla de replicación y ayuda a mantener la estabilidad del genoma durante la fase S. RADX antagoniza la carga de RAD51 en horquillas de replicación detenidas, dando forma a la recombinación homóloga y coordinando las respuestas al estrés replicativo. A través de estas funciones, contribuye a la preservación de la integridad de la horquilla de replicación, a la supresión de recombinación aberrante y al control de las vías de señalización del daño en el ADN. La desregulación del equilibrio entre protección de la horquilla y reparación asociado a RADX es relevante para los mecanismos que subyacen a los fenotipos de inestabilidad genómica observados en biología del cáncer y en otros modelos de enfermedad asociados al estrés replicativo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO RADX (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CXorf57 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CXorf57 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CXorf57 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RADX.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CXorf57 para la investigación de la señalización de RADX, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CXorf57 críticos para la función de RADX
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CXorf57 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido RADX CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RADX CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CXorf57. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RADX (h) y el plásmido HDR RADX (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CXorf57 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CXorf57 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.