Rab 27b Double Nickaseプラスミド (m2): sc-429802-NIC-2

マウスRab27bは小型GTPアーゼであるRab27bをコードしており、Rab27bはRasスーパーファミリーに属する分子として、Slp/Slac2ファミリータンパク質やミオシンモーターなどのエフェクターとの相互作用を介し、分泌顆粒やエンドソーム関連オルガネラのドッキングおよびエキソサイトーシスを制御することで小胞輸送を調節する。Rab27bの活性は、調節性分泌、リソソーム関連オルガネラの動態、ならびに細胞骨格の協調に寄与し、血小板の濃染顆粒放出、好中球の脱顆粒、上皮の分泌機能などの過程を支える。Rab27b依存的な輸送の破綻は、がんモデルにおける炎症応答の変化や転移性挙動と関連づけられており、分泌駆動性の微小環境リモデリングの研究に有用な標的となる。Rab27b関連試薬は、マウス初代細胞やin vivoモデルを用いた機序研究において、顆粒の生合成、エクソソームおよびセクレトームの制御、免疫・腫瘍生物学における小胞輸送表現型の解析に利用されている。

Rab 27b ダブルニカースプラスミド（m2）は、mouse 細胞株における Rab27b 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Rab27b内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Rab27bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Rab27bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。