Rab 25 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404721

概要

RAB25は、ベシクルの出芽、輸送、リサイクリングを制御するRabファミリーの低分子GTPアーゼであるRab25をコードしており、特に頂端膜（アピカル膜）輸送やエンドソームのソーティングにおいて重要な役割を担います。Rab25は、カーゴの送達や受容体リサイクリングを制御することで、上皮の極性、インテグリンのターンオーバー、ならびに細胞接着や遊走に関連する経路を介したシグナル伝達に影響を及ぼします。RAB25の発現や輸送回路の変化は、状況依存的に腫瘍生物学と関連づけられており、浸潤性や代謝適応への影響などが報告されています。輸送の要所（ノード）としてRab25は、極性をもつヒト細胞における膜動態、タイトジャンクションの構築、受容体依存的シグナル伝達を研究する上でも重要です。

Rab 25 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRAB25遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RAB25内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RAB25のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rab 25タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rab 25シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RAB25欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rab 25の機能に不可欠なRAB25エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RAB25ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rab 25 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRab 25 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RAB25遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rab 25 HDRプラスミド（h）および Rab 25 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRAB25ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRAB25標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。