Plásmido CRISPR de Activación (h) PSGL-1: sc-401534-ACT

SELPLG codifica el ligando-1 de la glicoproteína P-selectina (PSGL-1), un receptor de adhesión tipo mucina expresado de forma prominente en los leucocitos que media el anclaje y el rodamiento sobre el endotelio activado mediante su unión a las selectinas. PSGL-1 integra motivos de reconocimiento dependientes de la glicosilación con la señalización intracelular para coordinar el tráfico de leucocitos, la formación de la sinapsis inmunitaria y el reclutamiento inflamatorio. Este eje se cruza con la inflamación vascular y la regulación de la inmunidad innata y adaptativa, influyendo en vías que modelan las respuestas de citocinas y las interacciones célula–célula. La función y la expresión desreguladas de SELPLG/PSGL-1 se han asociado con fenotipos inflamatorios y autoinmunes, así como con la dinámica del microambiente tumoral-inmunitario, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudios mecanísticos en inmunología y oncología.

PSGL-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SELPLG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PSGL-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SELPLG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SELPLG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PSGL-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SELPLG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PSGL-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PSGL-1 en células tumorales con expresión de SELPLG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.