Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRRG1 (m): sc-436837

Présentation

Le gène murin **Prrg1** code **PRRG1**, une protéine transmembranaire riche en proline possédant un domaine **γ-carboxyglutamate (Gla)**, ce qui suggère des rôles dans des interactions protéiques dépendantes du calcium à la surface cellulaire. PRRG1 est impliquée dans la signalisation associée à l’adhésion et dans des processus régulateurs proximaux de la membrane, susceptibles d’influencer l’organisation du cytosquelette, le trafic des récepteurs et la communication entre la matrice extracellulaire et les voies intracellulaires. Les profils d’expression et les associations rapportées relient PRRG1 à des programmes de différenciation cellulaire et à l’homéostasie spécifique de certains tissus, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier des perturbations de signalisation dans des contextes développementaux et pathologiques. L’analyse fonctionnelle de PRRG1 peut aider à clarifier comment les protéines à domaine Gla modulent des microenvironnements locaux de signalisation et les réponses transcriptionnelles en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRRG1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prrg1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prrg1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prrg1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRRG1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prrg1 pour l'étude de la signalisation de PRRG1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Prrg1 essentiels à la fonction de PRRG1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prrg1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRRG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PRRG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prrg1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRRG1 plasmide HDR (m) et le PRRG1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prrg1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prrg1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.