Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRPS2 (h): sc-404095

Présentation

PRPS2 (phosphoribosylpyrophosphate synthétase 2) est une enzyme cytosolique qui catalyse la synthèse du 5‑phosphoribosyl‑1‑pyrophosphate (PRPP), un métabolite clé requis pour la biosynthèse des nucléotides puriques et pyrimidiques, à la fois de novo et par voie de sauvetage. En contrôlant la disponibilité du PRPP, PRPS2 relie le flux de ribose‑phosphate à la synthèse de l’ADN/ARN, à la signalisation dépendante des nucléotides et à la prolifération cellulaire, en intégrant des signaux issus de la glycolyse et de la voie des pentoses phosphates. Une dérégulation du métabolisme des nucléotides et de l’homéostasie du PRPP est associée à des altérations du contrôle de la croissance et à une reprogrammation métabolique observées dans de nombreux contextes pathologiques, notamment le cancer et des maladies héréditaires de la voie des purines. PRPS2 est donc largement étudiée dans les mécanismes de stress nucléotidique, la dynamique de réplication et les vulnérabilités métaboliques des cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRPS2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRPS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRPS2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRPS2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRPS2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRPS2 pour l'étude de la signalisation de PRPS2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRPS2 essentiels à la fonction de PRPS2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRPS2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRPS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PRPS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRPS2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRPS2 plasmide HDR (h) et le PRPS2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRPS2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRPS2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.