PRMT1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402249-ACT

PRMT1（protein arginine methyltransferase 1）は、ヒト細胞における主要なI型PRMTであり、ヒストンおよび多数の非ヒストン基質上のアルギニン残基の非対称ジメチル化を触媒します。これらの翻訳後修飾を介して、PRMT1はクロマチンのアクセス性、転写プログラム、RNAプロセシング、DNA損傷応答、シグナル伝達を制御し、メチル化依存的なタンパク質間相互作用を通じてMAPK/ERKおよびPI3K/AKT経路の出力とも顕著に関連します。PRMT1の活性は、エピジェネティック制御と転写後制御を協調させることで、細胞周期の進行、分化状態、ストレス適応を形作ります。PRMT1の発現異常や基質メチル化パターンの破綻は、がん生物学、免疫シグナル、神経生物学において、遺伝子発現やプロテオーム機能の変化と相関する分子基盤として頻繁に研究されています。

PRMT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRMT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PRMT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRMT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRMT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PRMT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRMT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPRMT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRMT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPRMT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。