Presenilin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403532-ACT

PSEN2 codifica a presenilina 2, um componente catalítico do complexo γ-secretase que medeia a proteólise intramembranar de múltiplas proteínas de membrana do tipo I, incluindo APP e receptores Notch. Por meio da atividade da γ-secretase, a presenilina 2 contribui para a sinalização de Notch, para a proteólise intramembranar regulada e para programas transcricionais a jusante que controlam decisões de destino celular. PSEN2 também está ligada à biologia endolisossomal e mitocondrial, à homeostase do cálcio e ao tráfego de membranas, processos que influenciam a função neuronal e as respostas ao estresse. Variações genéticas e alterações na função da presenilina 2 estão associadas a fenótipos neurodegenerativos, em especial a vias relacionadas à doença de Alzheimer envolvendo o processamento amiloidogênico da APP e a integridade sináptica.

Presenilin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSEN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Presenilin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSEN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSEN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Presenilin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSEN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Presenilin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Presenilin 2 em células tumorais com expressão de PSEN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.