Plásmido CRISPR de Activación (h) PRDM6: sc-406414-ACT

PRDM6 codifica un regulador transcripcional que contiene un dominio PR/SET y que modula el estado de la cromatina y programas de expresión génica vinculados a la especificación del linaje de músculo liso y a la homeostasis vascular. Al influir en la represión epigenética y en redes transcripcionales asociadas a la diferenciación, PRDM6 ayuda a coordinar la progresión del ciclo celular y el cambio fenotípico en células similares al músculo liso. La actividad desregulada de PRDM6 se ha asociado con fenotipos de desarrollo y remodelado vascular alterados, lo que lo hace relevante para estudios de biología cardiovascular y de contextos de señalización proliferativa. Su función reguladora nuclear sitúa a PRDM6 como un nodo útil para diseccionar el control dependiente de la cromatina del linaje y de la transcripción sensible al estrés.

PRDM6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRDM6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PRDM6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRDM6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRDM6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PRDM6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRDM6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PRDM6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PRDM6 en células tumorales con expresión de PRDM6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.