PRDM16 Double Nickase Plasmid (h): sc-403464-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PRDM16 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PRDM16 Double-Nickase-Plasmid (h) und PRDM16 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PRDM16 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PRDM16: sc-517625
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PRDM16 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403464-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PRDM16 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403464-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRDM16 kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsregulator mit PR/SET-Domäne, der epigenetische Kontrolle mit linienspezifischen Genexpressionsprogrammen verknüpft. Am besten bekannt ist PRDM16 dafür, Schicksalsentscheidungen von Adipozyten zu koordinieren – einschließlich brauner und beiger Adipogenese – über Interaktionen mit Koregulatoren sowie durch die Modulation von Gen-Netzwerken des mitochondrialen und oxidativen Stoffwechsels. PRDM16 trägt außerdem zu transkriptionellen Zuständen während der Entwicklung sowie in Stamm- und Vorläuferzellen bei und beeinflusst dadurch Differenzierung und Gewebehomöostase. Eine fehlregulierte PRDM16-Expression oder -Rearrangierung wurde in ausgewählten hämatologischen Kontexten mit veränderten metabolischen Phänotypen und onkogenen Transkriptionsprogrammen in Verbindung gebracht, was PRDM16 für pfadfokussierte mechanistische Studien relevant macht.
PRDM16 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PRDM16-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PRDM16 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PRDM16-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PRDM16-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.