PPM1H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412800

Übersicht

PPM1H codiert für die protein phosphatase Mg2+/Mn2+-abhängig 1H, eine Serin/Threonin-Phosphatase der PP2C-Familie, die Kinase-Signale durch Dephosphorylierung von Zielproteinen ausbalanciert, die an der zellulären Homöostase beteiligt sind. Über die Regulation phosphorylierungsabhängiger Signalwege wird PPM1H mit der Kontrolle von Zellproliferation, Stressantworten und Proteostase in Verbindung gebracht, einschließlich Prozessen, die den endosomalen Transport und den Proteinumsatz beeinflussen. Eine veränderte Expression oder Aktivität von PPM1H kann die Dynamik von Signalnetzwerken verschieben und wurde im Kontext einer krebsassoziierten Umverdrahtung der Phospho-Signalgebung sowie anderer Erkrankungen untersucht, bei denen das Gleichgewicht zwischen Phosphatasen und Kinasen gestört ist. Dadurch ist PPM1H ein nützlicher Knotenpunkt für mechanistische Studien zu phosphorylierungsgetriebenen Phänotypen und zur Kommunikation zwischen Signalwegen (Pathway Crosstalk).

Das PPM1H CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PPM1H-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PPM1H-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PPM1H nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PPM1H-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PPM1H-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PPM1H-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PPM1H-Exone abzielen, die für die PPM1H-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PPM1H-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PPM1H CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PPM1H CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PPM1H-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PPM1H HDR-Plasmid (h) und PPM1H HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PPM1H-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PPM1H-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.