PP2Cκ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433975
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PP2Cκ El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PP2Cκ, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PP2Cκ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-433975 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino Ppm1k codifica la fosfatasa proteica mitocondrial PP2Cκ, una fosfatasa de serina/treonina dependiente de Mg2+/Mn2+ que regula el catabolismo de los aminoácidos de cadena ramificada (BCAA) al desfosforilar el complejo deshidrogenasa de α-cetoácidos de cadena ramificada (BCKDH). Mediante el control de la actividad de BCKDH, PP2Cκ influye en el flujo mitocondrial de nutrientes, la homeostasis energética y la señalización metabólica vinculada a la disponibilidad de aminoácidos. La alteración de la función de Ppm1k se ha asociado con niveles modificados de BCAA y estrés metabólico mitocondrial, lo que la hace relevante para estudios de errores congénitos del metabolismo y de fenotipos metabólicos más amplios en los que el manejo de los BCAA está perturbado.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PP2Cκ (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ppm1k en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ppm1k junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ppm1k tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PP2Cκ.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ppm1k para la investigación de la señalización de PP2Cκ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ppm1k críticos para la función de PP2Cκ
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ppm1k para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PP2Cκ CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PP2Cκ CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ppm1k. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PP2Cκ (m) y el plásmido HDR PP2Cκ (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ppm1k para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ppm1k definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.