PP2Cκ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-433975

概要

マウスのPpm1kは、ミトコンドリアに局在するタンパク質ホスファターゼPP2Cκをコードしており、Mg2+/Mn2+依存性のセリン／スレオニンホスファターゼとして、分岐鎖α-ケト酸デヒドロゲナーゼ（BCKDH）複合体を脱リン酸化することで分岐鎖アミノ酸（BCAA）分解代謝を調節します。BCKDH活性の制御を介して、PP2Cκはミトコンドリアにおける栄養フラックス、エネルギー恒常性、ならびにアミノ酸利用可能性に連動した代謝シグナル伝達に影響を与えます。Ppm1k機能の破綻は、BCAA濃度の変動やミトコンドリア代謝ストレスと関連づけられており、先天代謝異常の研究や、BCAAの取り扱いが障害されるより広範な代謝表現型の解析において重要です。

PP2Cκ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpm1k遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppm1k内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppm1kのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PP2Cκタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PP2Cκシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppm1k欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PP2Cκの機能に不可欠なPpm1kエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppm1kゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PP2Cκ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPP2Cκ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppm1k遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PP2Cκ HDRプラスミド（m）および PP2Cκ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpm1kホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpm1k標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。