PP2B-Aα CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422383

概要

Ppp3ca は、タンパク質ホスファターゼ2B（PP2B-Aα／カルシニューリン）の触媒サブユニットAαをコードしている。これは Ca²⁺／カルモジュリン依存性のセリン／スレオニンホスファターゼで、細胞内カルシウムシグナルを転写プログラムおよび細胞骨格プログラムへと結び付ける。マウス細胞では、カルシニューリンが NFAT 転写因子などの主要基質を脱リン酸化し、カルシウム依存的な遺伝子発現、免疫シグナル伝達、ならびにシナプス可塑性を含む活動依存的な神経過程を制御する。PP2B-Aα は、イオンチャネルの調節、ミトコンドリアおよび代謝の適応、ストレス応答性シグナル伝達ネットワークを制御する経路にも関与する。カルシニューリン活性の異常は、実験モデルにおいて、免疫細胞活性化の変調、神経発生および神経変性に関わる表現型、さらに心筋・骨格筋の不適応なリモデリングと関連付けられている。

PP2B-Aα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpp3ca遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppp3ca内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppp3caのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PP2B-Aαタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PP2B-Aαシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppp3ca欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PP2B-Aαの機能に不可欠なPpp3caエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppp3caゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PP2B-Aα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPP2B-Aα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppp3ca遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PP2B-Aα HDRプラスミド（m）および PP2B-Aα HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpp3caホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpp3ca標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。