PP2B-Aα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422383
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PP2B-Aα Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PP2B-Aα-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PP2B-Aα: sc-17808
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PP2B-Aα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422383 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Ppp3ca kodiert die katalytische Aα‑Untereinheit der Proteinphosphatase 2B (PP2B‑Aα/Calcineurin), einer Ca²⁺/Calmodulin‑abhängigen Serin/Threonin‑Phosphatase, die intrazelluläre Calciumsignale mit transkriptionellen und zytoskelettalen Programmen verknüpft. In Mauszellen dephosphoryliert Calcineurin zentrale Substrate wie NFAT‑Transkriptionsfaktoren und prägt damit calciumabhängige Genexpression, Immunsignalgebung sowie aktivitätsabhängige neuronale Prozesse einschließlich synaptischer Plastizität. PP2B‑Aα ist an Signalwegen beteiligt, die die Regulation von Ionenkanälen, mitochondriale und metabolische Anpassungen sowie stressresponsive Signalnetzwerke steuern. Eine fehlregulierte Calcineurin‑Aktivität wurde in experimentellen Modellen mit veränderter Aktivierung von Immunzellen, neuroentwicklungsbezogenen und neurodegenerativen Phänotypen sowie maladaptivem Umbau von Herz‑ und Skelettmuskulatur in Verbindung gebracht.
Das PP2B-Aα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ppp3ca-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ppp3ca-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ppp3ca nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PP2B-Aα-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ppp3ca-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PP2B-Aα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Ppp3ca-Exone abzielen, die für die PP2B-Aα-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ppp3ca-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PP2B-Aα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PP2B-Aα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ppp3ca-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PP2B-Aα HDR-Plasmid (m) und PP2B-Aα HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ppp3ca-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ppp3ca-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.