Plasmide CRISPR/Cas9 KO POLR3B (h): sc-406739

Présentation

POLR3B code pour la deuxième plus grande sous-unité de l’ARN polymérase III, une enzyme multi-sous-unités responsable de la transcription de petits ARN non codants, notamment les ARNt, l’ARNr 5S et d’autres ARN courts nécessaires à la traduction et à la croissance cellulaire. En régulant la production de Pol III, POLR3B influence la biogenèse des ribosomes, la protéostasie et l’adaptation métabolique, en intégrant les voies de signalisation sensibles aux nutriments et au stress avec la capacité biosynthétique. La perturbation de la transcription par Pol III affecte la détection immunitaire innée des acides nucléiques cytosoliques ainsi que l’homéostasie transcriptionnelle plus globale, dans des états cellulaires prolifératifs comme différenciés. Des variants pathogènes de POLR3B sont associés au spectre des leucodystrophies liées à Pol III et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait un gène clé pour l’étude du dysfonctionnement des machineries transcriptionnelles dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO POLR3B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène POLR3B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du POLR3B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert POLR3B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine POLR3B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en POLR3B pour l'étude de la signalisation de POLR3B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de POLR3B essentiels à la fonction de POLR3B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de POLR3B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le POLR3B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le POLR3B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus POLR3B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le POLR3B plasmide HDR (h) et le POLR3B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie POLR3B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles POLR3B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.