Plasmide CRISPR/Cas9 KO POL H (h2): sc-401794-KO-2

Présentation

POLH code l’ADN polymérase êta (Pol η), une polymérase de synthèse translésionnelle de la famille Y qui permet le contournement fidèle des dimères de pyrimidines cyclobutanes induits par les UV au cours de la réplication de l’ADN. Elle intervient dans la tolérance aux dommages de l’ADN et la réponse au stress réplicatif, en coordination avec l’antigène nucléaire des cellules proliférantes (PCNA) et un mécanisme de basculement dépendant de l’ubiquitine, des polymérases réplicatives vers des polymérases TLS spécialisées. La perte ou le dysfonctionnement de Pol η compromet la stabilité du génome et accroît la mutagénèse induite par les UV, reliant POLH au xeroderma pigmentosum variant (XP‑V) ainsi qu’à des mécanismes plus larges de carcinogenèse dus à des défauts de réparation de l’ADN. Comme POLH se situe à l’interface entre le traitement des lésions associé à la réparation par excision de nucléotides et l’adaptation du point de contrôle de la phase S, il est fréquemment étudié dans les voies qui gouvernent les signatures mutationnelles et la dynamique des fourches de réplication.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO POL H (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène POLH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du POLH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert POLH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine POL H.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en POLH pour l'étude de la signalisation de POL H, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de POLH essentiels à la fonction de POL H
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de POLH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le POL H plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le POL H plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus POLH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le POL H plasmide HDR (h) et le POL H (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie POLH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles POLH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.