podoplanin CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420632-ACT

マウスのPdpnは、リンパ管内皮細胞、線維芽細胞性網状細胞、および一部の上皮系コンパートメントで発現するムチン型膜貫通糖タンパク質であるポドプラニンをコードしており、細胞形状、接着、ならびに方向性のある細胞運動を制御します。ポドプラニンは血小板受容体CLEC-2と結合し、RhoA/ROCKシグナル伝達を介した細胞骨格リモデリングに影響を与えるとともに、リンパ管新生、組織構築、ストローマ（間質）ネットワーク形成に重要なアクチンダイナミクスを協調的に制御します。腫瘍微小環境においては、PDPN陽性の間質細胞および腫瘍細胞が、浸潤性挙動、細胞外マトリックスのリモデリング、免疫細胞トラフィッキングの変化と関連することが示されています。さらに、PDPN発現の異常は炎症性リモデリングや線維化関連経路とも結び付けられており、血管・間質生物学の機序解明研究における有用な標的となっています。

podoplanin CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Pdpnの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

podoplanin CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Pdpn 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPdpn転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性podoplaninの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPdpn遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるpodoplanin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPdpn発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるpodoplanin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。