POD-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402890-LAC

TCF21 codifica o fator de transcrição basic helix–loop–helix POD-1, um regulador determinante de linhagem dos programas de diferenciação mesenquimal e estromal. POD-1 modula redes transcricionais que governam a sinalização epitélio–mesênquima, a remodelação da matriz extracelular e a morfogênese de órgãos, com efeitos a jusante no comprometimento do destino celular e na expressão gênica específica de tecidos. Alterações na atividade de TCF21/POD-1 têm sido associadas à desregulação de vias de desenvolvimento e a mudanças no estado de diferenciação relevantes para fibrose, interações tumor–estroma e para a biologia cardiovascular e renal. Como regulador transcricional endógeno, POD-1 oferece um ponto de entrada mecanístico para estudar o controle enhancer–promotor e a função de fatores de transcrição dependente do contexto em células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais POD-1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de TCF21 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais POD-1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição TCF21, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de POD-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo TCF21 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.