PNMTase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406591

Übersicht

PNMT (Phenylethanolamin-N-Methyltransferase) kodiert die PNMTase, das letzte Enzym der Katecholaminbiosynthese, das die Umwandlung von Noradrenalin zu Adrenalin katalysiert, wobei S‑Adenosyl‑L‑methionin als Methylgruppendonor dient. Die PNMTase-Aktivität verknüpft die neuroendokrine Signalübertragung des Nebennierenmarks und des sympathischen Nervensystems mit zellulären Stressantworten, integriert in glucocorticoidregulierte Transkriptionsprogramme sowie in den weiteren Tyrosinstoffwechsel. Durch die Modulation der Adrenalinverfügbarkeit beeinflusst PNMT nachgeschaltete Signalwege der adrenergen Rezeptoren, die kardiovaskuläre, metabolische und neuroverhaltensbezogene Prozesse betreffen. Veränderte PNMT-Expression oder -Regulation wurde mit einer gestörten Katecholaminhomöostase in stressassoziierten Phänotypen sowie in endokrinen und neuropsychiatrischen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht.

Das PNMTase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PNMT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PNMT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PNMT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PNMTase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PNMT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PNMTase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PNMT-Exone abzielen, die für die PNMTase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PNMT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PNMTase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PNMTase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PNMT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PNMTase HDR-Plasmid (h) und PNMTase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PNMT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PNMT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.