Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PMPCA CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406691
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PMPCA CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してPMPCAゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: PMPCA 抗体 (B-8): sc-390471
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PMPCA CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-406691 | 20 µg | $397.00 |
概要
PMPCAは、ミトコンドリア・プロセシング・ペプチダーゼ（MPP）のαサブユニットをコードしている。MPPはヘテロ二量体の金属プロテアーゼであり、核コードタンパク質がミトコンドリア・マトリックスへ輸送された後、そのN末端にあるミトコンドリア標的化プレ配列（プレシークエンス）を切断する。この成熟化過程を通じてPMPCAは、酸化的リン酸化複合体の組み立てと機能、ミトコンドリアのプロテオスタシス、さらにミトコンドリア生合成に結び付いたより広範なエネルギー代謝プログラムを支える。PMPCA活性が障害されると、ミトコンドリアタンパク質の成熟化が損なわれ、呼吸鎖の機能が変化し、アポトーシスや代謝リプログラミングと交差する細胞ストレス応答が誘発され得る。PMPCAのバリアントは、神経発達および神経変性の表現型を伴うミトコンドリア疾患と関連しており、ミトコンドリア機能不全の機序研究において重要な標的である。
PMPCA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPMPCA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PMPCA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PMPCAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PMPCAタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、PMPCAシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PMPCA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- PMPCAの機能に不可欠なPMPCAエクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、PMPCAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- PMPCA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPMPCA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PMPCA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
PMPCA HDRプラスミド（h）および PMPCA HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPMPCAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPMPCA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。