Plasmide CRISPR/Cas9 KO PMPCA (h): sc-406691

Présentation

PMPCA code la sous-unité alpha de la peptidase de maturation mitochondriale (MPP), une métalloprotéase hétérodimérique qui clive les préséquences de ciblage mitochondrial N‑terminales des protéines codées par le noyau après leur importation dans la matrice mitochondriale. Par cette étape de maturation, PMPCA contribue à l’assemblage et au fonctionnement des complexes de phosphorylation oxydative, au maintien de la protéostase mitochondriale et, plus largement, aux programmes de métabolisme énergétique liés à la biogenèse mitochondriale. Une altération de l’activité de PMPCA peut perturber la maturation des protéines mitochondriales, modifier les performances de la chaîne respiratoire et déclencher des réponses de stress cellulaire en lien avec l’apoptose et la reprogrammation métabolique. Des variants de PMPCA ont été associés à des maladies mitochondriales présentant des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du dysfonctionnement mitochondrial.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PMPCA (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PMPCA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PMPCA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PMPCA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PMPCA.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PMPCA pour l'étude de la signalisation de PMPCA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PMPCA essentiels à la fonction de PMPCA
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PMPCA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PMPCA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PMPCA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PMPCA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PMPCA plasmide HDR (h) et le PMPCA (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PMPCA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PMPCA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.