PLC β3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401181-ACT

PLCB3 kodiert die Phospholipase C beta 3 (PLCβ3), einen zentralen Effektor nachgeschaltet an G‑Protein‑gekoppelte Rezeptoren, der Phosphatidylinositol‑4,5‑bisphosphat hydrolysiert und dadurch Inositol‑1,4,5‑trisphosphat und Diacylglycerol erzeugt. Diese Signalachse erhöht das intrazelluläre Ca2+ und aktiviert die Proteinkinase C, wodurch Eingangssignale integriert werden, die Sekretion, Migration, Zytoskelett‑Remodelling und Transkriptionsprogramme regulieren. Die Aktivität von PLCβ3 verknüpft die GPCR‑Signalübertragung mit dem Phosphoinositid‑Umsatz und calciumabhängigen Signalwegen, die angeborene und adaptive Immunantworten sowie allgemeinere Übergänge von Zellzuständen prägen. Eine Fehlregulation der Phospholipase‑C‑Signalgebung wurde mit aberranter Proliferation und inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was PLCB3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Signaltransduktion und krankheitsrelevanter Zellverhalten macht.

PLC β3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PLCB3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PLC β3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PLCB3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PLCB3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PLC β3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PLCB3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PLC β3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PLC β3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PLCB3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.