PKC lambda/iota CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422263
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PKC lambda/iota Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PKC lambda/iota-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PKC lambda/iota: sc-376344
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PKC lambda/iota CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422263 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Prkci kodiert die atypische Protein-Kinase-C-Isoform PKC lambda/iota, eine Serin/Threonin-Kinase, die nachgeschaltet von Polaritätskomplexen wie PAR3–PAR6 wirkt und zur Etablierung der apikal-basolateralen Polarität, zur Organisation der Tight Junctions sowie zur asymmetrischen Zellteilung beiträgt. PKC lambda/iota integriert Signale aus PI3K- und von kleinen GTPasen regulierten Signalwegen, um Zytoskelett-Umbau, Vesikeltransport und epitheliale Morphogenese zu koordinieren. In Mausmodellen wurde eine veränderte Prkci-Aktivität mit gestörter Gewebearchitektur und abweichenden Entwicklungs- und Immunzellprogrammen in Verbindung gebracht, was Prkci für Studien zur epithelialen Integrität, Differenzierung und stressresponsiven Signalübertragung relevant macht. Seine zentrale Rolle in Polaritäts- und Wachstumskontrollwegen verknüpft eine Fehlregulation von Prkci zudem mit Mechanismen, die in der Krebsbiologie und der Stoffwechselforschung häufig untersucht werden.
Das PKC lambda/iota CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Prkci-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Prkci-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Prkci nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PKC lambda/iota-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Prkci-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PKC lambda/iota-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Prkci-Exone abzielen, die für die PKC lambda/iota-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Prkci-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PKC lambda/iota CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PKC lambda/iota CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Prkci-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PKC lambda/iota HDR-Plasmid (m) und PKC lambda/iota HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Prkci-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Prkci-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.