Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
PIPK I α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403490
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PIPK I α Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PIPK I α-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PIPK I α: sc-377021
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PIPK I α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-403490 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
PIP5K1A kodiert die Phosphatidylinositol-4-phosphat-5-Kinase Typ I alpha (PIPK I α), eine zentrale Lipidkinase, die an der Plasmamembran und an Endomembranen Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphat (PI(4,5)P2) erzeugt. Durch die Kontrolle der Verfügbarkeit von PI(4,5)P2 reguliert PIPK I α den Umbau des Aktin-Zytoskeletts, die clathrinvermittelte Endozytose, die Dynamik fokaler Adhäsionen sowie die Kopplung von Rezeptorsignalen an nachgeschaltete Signalwege wie PLC und PI3K. Die von PIP5K1A abhängige Phosphoinositid-Signalübertragung beeinflusst Membrantransport und Zellmigration – Prozesse, die in der Tumorbiologie und bei invasiven Phänotypen häufig gestört sind. Veränderte PIP5K1A-Aktivität wurde zudem mit fehlregulierter Wachstumsfaktor-Signalgebung und entzündlichen Antworten in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für mechanistische Studien krankheitsassoziierten Zellverhaltens unterstreicht.
Das PIPK I α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PIP5K1A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PIP5K1A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PIP5K1A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PIPK I α-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PIP5K1A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PIPK I α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf PIP5K1A-Exone abzielen, die für die PIPK I α-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere PIP5K1A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PIPK I α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PIPK I α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PIP5K1A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PIPK I α HDR-Plasmid (h) und PIPK I α HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PIP5K1A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PIP5K1A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.