Pim-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400376-ACT

PIM1 kodiert Pim-1, eine konstitutiv aktive Serin/Threonin-Kinase, die Signale von Zytokinen und Wachstumsfaktoren integriert, um Zellüberleben, Proliferation und metabolische Fitness zu regulieren. Pim-1 moduliert zentrale Signalnetzwerke wie JAK/STAT, PI3K/AKT und NF-κB und phosphoryliert Substrate, die den Zellzyklusverlauf und die Apoptose beeinflussen, darunter BAD, p21 sowie transkriptionelle Regulatoren. Durch diese Aktivitäten beeinflusst PIM1 die Funktion hämatopoetischer und Immunzellen und trägt zu stressadaptiven Programmen bei, die in onkogenen Kontexten vereinnahmt werden können. Eine dysregulierte PIM1-Expression und -Signalgebung wurde mit veränderter Proliferationskontrolle, therapieresistenten Phänotypen in Modellsystemen und krankheitsrelevanten transkriptionellen Zuständen in mehreren Krebsarten in Verbindung gebracht.

Pim-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PIM1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Pim-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PIM1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PIM1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Pim-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PIM1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Pim-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Pim-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PIM1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.