PICH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407026

Descripción general

ERCC6L codifica PICH, una translocasa de ADN dependiente de ATP de la familia SNF2 que se localiza en puentes de ADN ultrafinos durante la anafase y promueve una segregación cromosómica fiel. PICH coopera con las vías de respuesta al daño del ADN y de decatenación al remodelar la cromatina y coordinar la resolución de cromátidas hermanas entrelazadas, contribuyendo a la estabilidad del genoma bajo estrés replicativo. Al regular la progresión mitótica y prevenir la segregación errónea de cromosomas, PICH influye en resultados celulares vinculados a la aneuploidía y la inestabilidad genómica. La actividad desregulada de ERCC6L/PICH se ha asociado con fenotipos proliferativos y se estudia en el contexto de la biología del cáncer y otros trastornos relacionados con el mantenimiento del genoma.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PICH (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ERCC6L en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ERCC6L junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ERCC6L tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PICH.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ERCC6L para la investigación de la señalización de PICH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ERCC6L críticos para la función de PICH
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ERCC6L para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PICH CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PICH CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ERCC6L. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PICH (h) y el plásmido HDR PICH (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ERCC6L para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ERCC6L definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.