Plásmido Doble Nickase (h) PIAS 1: sc-402407-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PIAS 1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PIAS 1 (h) y el plásmido de doble nickasa PIAS 1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PIAS1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PIAS 1 Anticuerpo (F-1): sc-365127
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PIAS 1 | sc-402407-NIC | 20 µg | $410.00 |
PIAS1 codifica el inhibidor proteico de STAT1 activado (PIAS1), una ligasa E3 de SUMO que modula la actividad de factores de transcripción y la señalización asociada a la cromatina. PIAS1 regula las respuestas a citocinas e interferones al atenuar la transcripción dependiente de STAT1 y también interactúa con las vías de NF-κB, p53 y respuesta al daño del ADN mediante un control dependiente de la SUMOilación de la estabilidad, localización y ocupación de promotores de las proteínas. A través de estas funciones, PIAS1 influye en la progresión del ciclo celular, la apoptosis y los programas génicos inflamatorios, y la actividad alterada de PIAS1 se ha vinculado con una señalización inmunitaria desregulada y estados transcripcionales asociados a tumores. Su función en la intersección entre la modificación postraduccional y el control transcripcional convierte a PIAS1 en una diana útil para estudios mecanísticos del acoplamiento entre señalización y expresión génica.
PIAS 1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PIAS1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PIAS1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PIAS1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PIAS1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.