PHF8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407306

Descripción general

PHF8 codifica una desmetilasa de histonas con dominio JmjC que reconoce H3K4me3 mediante su dedo PHD y elimina marcas represivas de metilación en lisina, como H3K9me2/1 y H4K20me1, para modular la accesibilidad de la cromatina. A través del control epigenético de la transcripción, PHF8 contribuye a la progresión del ciclo celular, a las respuestas al daño del ADN y a programas de diferenciación específicos de linaje. La función de PHF8 se entrecruza con vías de remodelación de la cromatina y de regulación transcripcional que moldean las redes de expresión génica durante el desarrollo. La desregulación o mutación de PHF8 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con estados transcripcionales alterados observados en la reprogramación epigenética relacionada con el cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PHF8 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PHF8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PHF8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PHF8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PHF8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PHF8 para la investigación de la señalización de PHF8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PHF8 críticos para la función de PHF8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PHF8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PHF8 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PHF8 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PHF8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PHF8 (h) y el plásmido HDR PHF8 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PHF8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PHF8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.