Plasmide CRISPR/Cas9 KO PHC3 (h): sc-406576

Présentation

PHC3 (polyhomeotic homolog 3) est un composant central du complexe répressif Polycomb 1 (PRC1), qui contribue à la compaction de la chromatine et au silençage transcriptionnel stable de gènes du développement et de l’identité cellulaire. Par une régulation épigénétique dépendante de Polycomb, PHC3 participe au maintien des programmes de lignée et à la régulation de la prolifération en façonnant des états de chromatine répressive liés à l’ubiquitination des histones. Une activité Polycomb altérée et une répression dérégulée associée à PRC1 sont fréquemment impliquées dans des programmes transcriptionnels oncogéniques et des différenciations aberrantes, ce qui rend PHC3 pertinent pour l’étude de la biologie tumorale et du contrôle épigénétique. La fonction de PHC3 est aussi utilisée comme indicateur pour comprendre comment les régulateurs de la chromatine coordonnent des réseaux géniques au cours du développement et des réponses au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PHC3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PHC3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PHC3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PHC3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PHC3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PHC3 pour l'étude de la signalisation de PHC3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PHC3 essentiels à la fonction de PHC3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PHC3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PHC3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PHC3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PHC3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PHC3 plasmide HDR (h) et le PHC3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PHC3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PHC3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.