Plasmide CRISPR/Cas9 KO PH-4 (h): sc-409966

Présentation

P4HTM code la protéine transmembranaire prolyl 4‑hydroxylase (PH‑4), une dioxygénase associée au réticulum endoplasmique qui catalyse l’hydroxylation de la proline sur certains substrats, reliant la disponibilité en oxygène et en cofacteurs métaboliques à la modification post‑traductionnelle des protéines. En tant que membre de la famille des prolyl 4‑hydroxylases, PH‑4 est susceptible d’influencer le repliement, la stabilité et les processus de contrôle qualité des protéines au sein de la voie sécrétoire, avec des effets en aval sur les réponses au stress cellulaire et la protéostasie. L’activité de P4HTM a été associée à la biologie de la détection de l’oxygène et à la régulation de la signalisation dépendante de l’hypoxie, en s’intégrant à des voies qui façonnent l’adaptation cellulaire à une tension en oxygène réduite. Des études génétiques et fonctionnelles ont impliqué P4HTM dans des phénotypes pertinents pour la maladie affectant le neurodéveloppement et l’homéostasie métabolique, ce qui en fait une cible d’études mécanistiques dans des systèmes cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PH-4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène P4HTM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du P4HTM, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert P4HTM à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PH-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en P4HTM pour l'étude de la signalisation de PH-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de P4HTM essentiels à la fonction de PH-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de P4HTM pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PH-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PH-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus P4HTM. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PH-4 plasmide HDR (h) et le PH-4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie P4HTM pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles P4HTM définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.